Oltre a Mario, Super Mario Run contiene 5 personaggi sbloccabili. Ciascuno ha caratteristiche diverse, elencate di seguito insieme ai requisiti per poterli sbloccare.
Nota: Per trovare nuovi colori di Toad bisogna prima proseguire nella modalità Giro dei mondi.
Come ogni gioco che si rispetti, Mario viene presentato come il personaggio più bilanciato e semplice da usare. Non ha nessuna particolare caratteristica, se non sapete chi scegliere potete andare tranquilli con lui.
Mario non va sbloccato, è disponibile dall'inizio.
Come già visto in tanti altri giochi, Luigi salta più in alto di suo fratello. Questo rende più semplice raggiungere determinati punti nei livelli. Inoltre, tenendo premuto lo schermo mentre si è a mezz'aria, Luigi può planare lievemente. Lo trovo più adatto di Mario per ogni tipo di giocatore, inoltre le sue acrobazie sono spassose assai.
Come sbloccarlo: bisogna comprare la Casa di Luigi nella modalità Regno.
Requisiti: 150 Toad verdi e 150 Toad viola nella modalità Sfide Toad.
Toad è decisamente più ostico da utilizzare e lo consiglio ai giocatori che cercano una sfida più impegnativa. Corre più veloce, salta meno in alto e non può ricevere danni aggiuntivi se prende un Superfungo, il quale gli dà a prescindere cinque monete in più. È un'ottima scelta nella Sfida dei Toad, ma bisogna essere piuttosto bravi per padroneggiarlo.
Come sbloccarlo: bisogna collegare Super Mario Run a un account MyNintendo.
Nonostante l'abbiamo vista rimpicciolirsi e ingrandirsi con i Superfunghi in 3D World, Peach in Super Mario Run ottiene solamente 5 monete raccogliendone uno, e perde una vita se viene colpita una sola volta. La sua abilità può tuttavia rivelarsi davvero utile: toccando lo schermo mentre è a mezz'aria planerà proprio come Luigi; la differenza è che Peach riesce a librarsi a mezz'aria per più tempo. Peach può servire per raggiungere particolari luoghi più facilmente o per sormontare vari ostacoli.
Come sbloccarla: bisogna battere Bowser nel livello 6-4 (ovvero finire la modalità Giro dei mondi).
Yoshi è un altro personaggio che non riceve bonus da un Superfungo, se non cinque monete extra. Sa rendere comunque la vita facile ai giocatori: tenendo premuto lo schermo a mezz'aria può fluttuare per alcuni secondi, ed è immune agli aculei; non deve quindi temere di saltare sopra Marghibruchi o altri ostacoli appuntiti.
Come sbloccarlo: bisogna comprare la Casa di Yoshi nella modalità Regno.
Requisiti: 30 Toad rossi e 30 Toad gialli nella modalità Sfide Toad.
Toadette non ha abilità particolari e non può subire danni extra. La sua peculiarità entra in gioco durante la fase di conteggio punti nelle Sfide Toad. Toadette è in grado di sottrarre Toad agli avversari, decrementando il loro punteggio e incrementando il nostro. È senz'altro il personaggio più conveniente da usare per accumulare centinaia di Toad in poco tempo. Tuttavia, non avendo altre abilità da sfruttare durante la sfida, bisogna saper padroneggiare per bene i comandi di gioco e le acrobazie.
Come sbloccarla: bisogna comprare la Casa di Toadette nella modalità Regno.
Requisiti: 200 Toad di ogni colore nella modalità Sfide Toad.